Skip to content

kościuszki 135 wrocław dolnośląskie

1 miesiąc ago

719 words

Zbadaliśmy tę możliwość, wykazując, że można indukować skuteczną odpowiedź immunologiczną anty-FAP zależną od limfocytów T CD8 +, co znacznie tłumiło guzy pierwotne, jak również ustalony przerzutowy wzrost nowotworu opornych na wiele leków mysich CT22 i komórek raka sutka D2F2. Co ważniejsze, byliśmy w stanie zademonstrować, że interferencja z fibroblastami związanymi z nowotworem może służyć jako nowa strategia zmniejszania kolagenu typu I wewnątrz jelita, a tym samym zwiększania wychwytu środków chemioterapeutycznych. Połączenie chemioterapii ze szczepionką FAP spowodowało wyraźny spadek pierwotnego wzrostu guza sutka, przy czym 50% zwierząt całkowicie odrzuciło prowokację i 3-krotne wydłużenie przeżycia w doświadczalnym modelu przerzutowego raka sutka. Wyniki Budowa i ekspresja wektora pcDNA3.1 / V5-His-TOPO-Fap. Po skonstruowaniu eukariotycznego wektora ekspresyjnego pcDNA3.1 / V5-His-TOPO-Fap (pFap), jak opisano w Metodach (Figura 1A), wykazaliśmy prawidłową ekspresję białka FAP 88 kDa przez blotting Western lizatów komórkowych z obu przejściowych transfekowany rak okrężnicy CT26 i komórki raka sutka D2F2, które same nie wyrażają FAP (Figura 1B). Figura 1Charakteryzacja konstruktu FAP i chemoopornych linii komórek nowotworowych. (A) cDNA kodujący cały mysi FAP, zweryfikowany przez sekwencjonowanie nukleotydów, wstawiono do miejsca EcoRI wektora pFap. (B) Ekspresję białka wykazano metodą blottingu Western po przejściowej transfekcji komórek CT26 i D2F2. (C) Komórki raka okrężnicy CT26 i D2F2 leczono różnymi środkami chemioterapeutycznymi we wskazanych stężeniach. Po 48 godzinach inkubacji oceniano apoptozę jądrową przez barwienie barwnikiem Hoechst 33342. Staurosporynę zastosowano jako kontrolę pozytywną. PCMV, natychmiastowy wczesny promotor / wzmacniacz ludzkiego cytomegalowirusa; BGHpA, sygnał poliadenylacji bydlęcego hormonu wzrostu; f1 ori, pochodzenie f1; SV40 ori, wczesny promotor SV40 i pochodzenie; gen oporności na neomycynę, neomycynę (G418); SV40pa, sygnał poliadenylacji SV40; pUC, pochodzenie pUC; ampicylina, gen oporności na ampicylinę (a-laktamazy). Oporność wielolekowa klonów komórek CT26 i D2F2. Po kilku latach stosowania raka jelita grubego CT26 i komórek raka sutka D2F2 w naszym laboratorium odkryliśmy, że klony obu linii komórkowych nabyły chemorezystancję. Po dodaniu 5 środków chemioterapeutycznych indukujących apoptozę (Figura 1C), wyłącznie winblastyna była zdolna do wywoływania mniejszych apoptotycznych efektów w klonie raka okrężnicy CT26, chociaż tylko w bardzo wysokim stężeniu 5. M. Wcześniej zgłaszano, że IC50 dla 5-fluorouracylu oryginalnej linii komórkowej CT26 wynosi 1,85 (M (22). Jednakże nie byliśmy w stanie wywołać apoptozy jądrowej w naszym klonie nawet w stężeniu sięgającym nawet 100 .m. W komórkach raka piersi D2F2 tylko doksorubicyna testowana w najwyższym stężeniu 1.M była w stanie wywołać apoptozę jądrową, określoną przez barwienie barwnikiem Hoechst 33342. Doszliśmy do wniosku, że obie linie komórkowe uzyskały oporność wielolekową podczas długotrwałego stosowania w naszym laboratorium. Profilaktyczne leczenie szczepionką DNA opartą na FAP hamuje wzrost guza pierwotnego. Dziesięć dni po ostatniej z 3 immunizacji przez zgłębnik w odstępach 1-tygodniowych, prowokowaliśmy różne grupy myszy BALB / c (n = 8) albo sc z komórkami raka okrężnicy CT26 lub ortotopowo komórkami raka sutka D2F2, jak opisano w Metodach. Udowodniliśmy, że doustnie podawana szczepionka DNA kodująca mysie FAP może rzeczywiście hamować wzrost guza pierwotnego zarówno klonu CT26 opornego na wiele leków (Figura 2A), jak i klonu D2F2 (Figura 2B). Aby zbadać, czy moglibyśmy dalej poprawić skuteczność szczepionki, połączyliśmy ją najpierw z wektorem kodującym chemokinę CCL21 (pCCL21), który jak wcześniej wykazano przyciągał dojrzałe komórki dendrytyczne (23), jak również nieskuteczne komórki T (24). , a po drugie, z wektorem kodującym IL-2 (pIL2), znanym induktorem proliferacji komórek T (25). Jednak kombinacja szczepionki FAP z samym pCCL21 (Figura 2B) lub z pIL2 i pCCL21 (Figura 2A) nie poprawiła jeszcze swojej skuteczności. Rycina 2 Wpływ szczepionki DNA na bazie FAP na wzrost guza. (A i B) Ustawienie profilaktyczne. Dziesięć dni po ostatnim z 3 szczepień w odstępach 1-tygodniowych, przeprowadzonych jak opisano w Metodach, myszy BALB / c (n = 8) poddano prowokacji sc śmiertelną dawką 3 × 104 komórek CT26 (A) lub ortotopowo śmiertelnym. dawka 3 × 105 komórek D2F2 (B). Średni. Wykreślono SEM wzrostu guza 8 myszy
[przypisy: łowisko u bogdana, biedronka świątniki górne, zatańcz ze mną cda ]
[więcej w: błonnik witalny gdzie kupić, zatańcz ze mną cda, leclerc godziny otwarcia ]