Skip to content

Odpowiedzi limfocytów T CD8 + Multichpitope na szczepionkę peptydową NY-ESO-1 powodują nieprecyzyjne ukierunkowanie guza cd

2 miesiące ago

696 words

Porcje (150 ul) usunięto we wskazanych punktach czasowych i natychmiast zamrożono w ciekłym azocie, aby zatrzymać reakcje enzymatyczne. Próbki degradacji testowano następnie w doświadczeniach z miareczkowaniem peptydów CTL na komórkach T2 znakowanych 51Cr, jak opisano powyżej. Eksperymenty degradacji peptydów dla peptydów kontrolnych NY-ESO-1 i Melan-A przeprowadzono w warunkach redukujących przy użyciu TCEP, jak wyszczególniono powyżej. Wykrywanie specyficznych odpowiedzi immunologicznych NY-ESO-1 157-165a u pacjentów z mięsakiem zaszczepionych peptydami NY-ESO-1 157-165 i 157-167. Próbki PBMC dostępne od trzech pacjentów z mięsakiem stymulowano in vitro przez tydzień peptydem NY-ESO-1 157-165 (9-157) lub 157-167 (11-157). Hodowle początkowo monitorowano przez barwienie multimerem A2 / peptydem (M) zawierającym peptyd 9-157 (M 9-157, poniżej). Komórki T M 9-157 + CD8 + były wyraźnie wykrywalne dla LUD pacjenta 24/1 w post-szczepieniu, ale nie w próbkach przed szczepieniem i po stymulacji peptydem 9-157 lub 11-157 (Figura 1). Podobne wyniki uzyskano dla pacjenta LUD 24/3. Dla pacjenta LUD 24/2 nie było dostępnej próbki przedszczepienniczej; jednak komórki T 9-157 + CD8 + były wykrywalne w próbce po szczepieniu po stymulacji in vitro peptydem 11-157, ale nie 9-157. Częstotliwości komórek T 9-157 + CD8 + w stymulowanych peptydem peptydach pobranych od trzech pacjentów po podaniu szczepionki z trzech pacjentów przedstawiono w Tabeli 2. Figura 1M Odpowiedzi komórek T-9-157 + CD8 + u pacjentów z mięsakiem otrzymujących szczepionkę peptydową NY-ESO-1 . Przed i po szczepieniu próbki PBMC od pacjenta LUD 24/1 (dzień po szczepieniu 169 po szczepieniu) stymulowano in vitro peptydem NY-ESO-1 9-157 lub peptydem NY-ESO-1 11-157 (1.M). hoduje się przez tydzień i wybarwia multimers PE A2 / 9-157 i mAbFITC anty-CD8. Tabela 2Detekcja określonych populacji CD8 + przez barwienie stymulowanych in vitro PBMC z odpowiednimi multimerami A2 / peptyd Identyfikacja dodatkowych potencjalnych epitopów z ograniczeniem A2 w regionie NY-ESO-1 157-167. Aby dokładniej ocenić reakcję na szczepionkę, sprawdziliśmy sekwencję 11-157, aby określić, czy ta ostatnia może zawierać, oprócz 9-157, inne nie opisane wcześniej epitopy CTL. Jak podsumowano w Tabeli 1, region ten zawiera dwa dodatkowe nieapeptydy i dwa dekapeptydy, które mogą być prezentowane w połączeniu z A2. Potencjalną zdolność wiązania do A2 9- i 10-merów w regionie 157-167 określono najpierw za pomocą algorytmu, który oblicza teoretyczną szybkość dysocjacji odpowiadających kompleksów A2 / peptydów w oparciu o ich skład aminokwasowy (dostępny w Bioinformatics and Molecular Sekcja analizy NIH: http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla-bind; odn. 18). Doświadczalne wiązanie oceniano za pomocą testu funkcjonalnej konkurencji, jak opisano wcześniej (11). Peptydy 159-167 (9-159) i 158-167 (10-158) miały przewidywane wiązanie wyższe niż 9-157. Zostało to potwierdzone danymi eksperymentalnymi w przypadku 9-159 (tabela 1), natomiast w przypadku 10-158 wiązanie eksperymentalne było porównywalne z 9-157. Przeciwnie, peptydy 158-166 (9. 158) i 157-166 (10. 157) miały bardzo słabe przewidywane wiązanie. Jednak ich eksperymentalne wiązanie było porównywalne z wiązaniem 9-157. Na poparcie eksperymentalnych danych dotyczących wiązania uzyskano skuteczne ponowne fałdowanie multimerów A2 / peptydów dla wszystkich peptydów NY-ESO-1 wymienionych w Tabeli 1. Pacjenci z mięsakiem zaszczepionymi peptydami NY-ESO-1 9-157 i 11-157 odpowiadają różnym zachodzące na siebie epitopy z ograniczeniem A2 w regionie 157-167. Pożywka stymulowana peptydem PBMC z trzech pacjentów uprzednio wybarwionych M9-157 (Figura i Tabela 2) wybarwiono panelem multimerów A2 / peptydów obejmujących każdy z 9 i 10 merów w Tabeli 1. Jak podsumowano. w Tabeli 2 nie uzyskano znaczącego zabarwienia w próbkach stymulowanych 9-157 za pomocą dowolnych multimerów A2 / NY-ESO-1 innych niż te zawierające 9-157. Jedynym wyjątkiem była stosunkowo mała populacja komórek T 10-157 + CD8 + (0,27%, tabela 2) obserwowana w LUD pacjenta 24/1. Przeciwnie, w hodowlach stymulowanych peptydem 11-157 wykryto multimery A2 + peptyd multimer + T z multimerami zawierającymi kilka innych peptydów NY-ESO-1. Po pierwsze znaczna część komórek T 9-159 + CD8 + była wykrywalna dla wszystkich pacjentów. Co ciekawe, odpowiedzi komórek T CD8 + na ten epitop znaleziono u pacjenta z rakiem po podobnym protokole szczepienia w równoległym badaniu (sponsorowanym przez Ludwig Institute for Cancer Research i trwającym w Weill Medical College of Cornell University, Nowy Jork, Nowy Jork, USA, Sacha Gnjatic, komunikacja osobista)
[patrz też: ciśnienie atmosferyczne a samopoczucie, nefrolog dziecięcy wrocław, sprzęt rehabilitacyjny dla dzieci ]
[przypisy: łowisko u bogdana, łowisko u roberta, u bogdana ]