Skip to content

Zmniejszenie dystrofii mięśniowej u myszy poprzez nadekspresję SERCA w mięśniach szkieletowych czesc 4

2 miesiące ago

8 words

Zastosowano co najmniej 3 myszy z każdego genotypu. * P <0,05 w porównaniu z TRPC3 TG. Liczba użytych myszy jest pokazana na wykresie. Zwiększony wychwyt Ca2 + z SR u myszy z nadekspresją SERCA1. Aby dokładniej zbadać mechanizm, w którym nadekspresja SERCA1 może chronić przed MD, mierzyliśmy bezpośrednio wychwyt SR Ca2 + w lizatach z mięśnia odpowiednich genotypów. Zgodnie z przewidywaniami, wychwyt SR Ca2 + był około 2-krotnie wyższy u myszy WT (Sgcd + / +) zawierających transgen SERCA1 w porównaniu z myszami bez transgenu SERCA1 (Figura 5, A i C). Zgodnie z wcześniejszymi obserwacjami w miofubach dystroficznych / miotubach, maksymalny wychwyt Ca2 + SR był znacząco zmniejszony w Sgcd A / P. myszy w porównaniu z kontrolą WT (Sgcd + / +) (Figura 5C). Co ważniejsze, wychwyt SR Ca2 + w Sgcd. /. Myszy Tg były 3-krotnie większe niż w Sgcd. /. myszy i aktywność przywrócono do poziomów wyższych niż te w przypadku kontroli WT (Figura 5, B i C). Obliczona wartość EC50 (pCa) nie różniła się istotnie w żadnej z grup, co sugeruje, że zwiększona ekspresja SERCA1 nie zmieniła swojego powinowactwa do Ca2 + (dane nie przedstawione). Łącznie, wyniki te wskazują, że nadekspresja SERCA1 dramatycznie zwiększa zdolność wychwytu zwrotnego Ca2 + SR i koryguje deficyt obserwowany w Sgcdp /. myofibers. Figura 5SERCA1 zwiększa wychwyt Ca2 + SR w Sgcd. /. myszy. (A) Średnie średnie wartości wychwytu Ca2 + SR w myszach Sgcd + / + (WT) i Sgcd + / + – SERCA1 Tg w funkcji pCa2 +. (B) Średnie średnie wartości wychwytu Ca2 + SR w Sgcd A / P i myszy Sgcdp / p-SERCA1 Tg w funkcji pCa2 +. (C) Średnia maksymalna prędkość określona dla każdego genotypu w pomiarach wychwytu SR Ca2 +. * P <0,05 w porównaniu z Sgcd + / +; P <0,05 w porównaniu z Sgcdp / y. Liczba użytych myszy jest pokazana na wykresie. Nadekspresja SERCA1 przywraca defekty sprzężenia EC obserwowane w miofibry dystroficznych. W wielu badaniach wykazano deficyty globalnego sprzężenia EC w dystroficznych włóknach mięśniowych (25-27). Obejmują one znaczne zmniejszenie szczytowej amplitudy przejściowego i zmniejszonego wychwytu Ca2 + Ca2 + do SR. W tym miejscu zbadaliśmy, czy zwiększenie wychwytu Ca2 + w SR z nadekspresją SERCA1 może złagodzić defekty globalnego sprzężenia EC obserwowane w mięśniach dystroficznych mięśni. Ocenialiśmy wywołane elektrycznie stany Ca2 + w ostrych izolowanych pojedynczych włóknach FDB w Sgcd + / + i Sgcd P / p myszy zi bez transgenu SERCA1. Co interesujące, szczytowa amplituda przejściowego Ca2 + była zwiększona w miotłach WT (Sgcd + / +) z transgenem SERCA1 w porównaniu z samym WT (Figura 6, A, B i E). Zgodnie z wynikami w literaturze, szczytowa amplituda przejściowego Ca2 + była zmniejszona w Sgcdp / l. miofibry w porównaniu z włóknami WT, ale temu zmniejszeniu zapobiegał transgen SERCA1 (Figura 6, C = E). Obciążenie SR Ca2 + oszacowane za pomocą 4-chloro-m-krezolu (4-CMC, w celu uwolnienia zapasów SR Ca2 +) nie różniło się istotnie pomiędzy Sgcd A / P i Miotacze WT (Figura 6G). Jednakże, transgen SERCA1 znacznie podnosił obciążenie Ca2 + SR w mięśniach brzusznych WT powyżej poziomów WT, ale nie w Sgcd A / b. myofibers (rysunek 6G). Co ważniejsze, faza wychwytu zwrotnego profilu Ca2 + wywołanego 4-CMC i czas zaniku przejściowego Ca2 + były znacząco przedłużone w mięśniakach z Sgcdp / p. myszy, i tę wadę korygowano transgenem SERCA1 (Figura 6, C, D i F). Podobnie, miofibry FDB z myszy mdx również wykazały zmniejszenie amplitudy przejściowego Ca2 + i wydłużenie czasu relaksacji, parametry, które zostały ponownie skorygowane przez transgen SERCA1 (Figura 6, H i I). Podsumowując, wyniki te pokazują, że dystroficzne miowłókna mają znaczące wady w manipulowaniu SR Ca2 +, które można skorygować za pomocą ekspresji SERCA1. Figura 6 Nadekspresja SERCA1 zwiększa sprzężenie EC i klirens Ca2 + w Sgcd A / P i miofibry mdx. (A. D) Reprezentatywne ślady zmian w ratiometrycznych stosunkach fluorescencji w ostrych izolowanych włóknach FDB z Sgcd2 /. myszy w odpowiedzi na stymulację elektryczną i chemiczną w czasie. Nawiasy w C i D pokazują charakterystykę wychwytu zwrotnego Ca2 +. (E) Amplituda przejściowego Ca2 + po elektrycznej stymulacji falowej we wskazanych genotypach pokazanych w legendzie obok F (dotyczy E. G). (F) Stała czasowa zaniku (.) I (G) maksymalnej odpowiedzi na 4-CMC we wskazanych genotypach ocenianych za pomocą analizy współczynnika Fura-2. * P <0,05 versus Sgcd + / +; P <0,05 względem Sgcd (3/3. Liczba włókien użytych w E. G jest pokazana na wykresach. (H) Amplituda przejściowego Ca2 + po elektrycznej stymulacji falowej w miofibresach FDB myszy mdx i kontrolnych, jak wskazano [przypisy: dieta montignaca przepisy, sprzęt rehabilitacyjny dla dzieci, polipy woreczka żółciowego ] [podobne: sezam właściwości lecznicze, biustonosze na duzy biust, polipy woreczka żółciowego ]