Skip to content

Zmniejszenie dystrofii mięśniowej u myszy poprzez nadekspresję SERCA w mięśniach szkieletowych cd

2 miesiące ago

122 words

Liczba myszy użytych do oceny ilościowej jest pokazana na wykresach. (G) Czas zmęczenia w minutach z wymuszoną bieżnią działającą we wskazanych grupach myszy. (H) Oznaczanie ilościowe poziomów CK w surowicy w Sgcd A /. i myszy Sgcdp / p-SERCA1 Tg w 3 miesiącu życia. (I) Reprezentatywne obrazy immunofluorescencji wychwytu EBD w przekrojach histologicznych z mięsień czworogłowy 3-miesięcznych myszy poddanych bieganiu przez 2 dni w obecności EBD. Błony są zabarwione na zielono, podczas gdy włókna dodatnie na EBD mają barwę czerwoną. Oryginalne powiększenie, × 100. (J) Ilościowe określenie całkowitych włókien EBD w mięsień czworogłowy, brzuchaty łydki, TA, przeponę i soleus z co najmniej 3 myszy w każdym genotypie. * P <0,05 w porównaniu do Sgcd2 / 3. Liczba użytych myszy jest pokazana na każdym z wykresów. Nadekspresja SERCA1 poprawia MD u myszy mdx. Mysi model Duchenne MD z wadliwą ekspresją dystrofiny wynika z mutacji mdx. Ten model, który odpowiada najbardziej rozpowszechnionej postaci ludzkiej MD, jest zazwyczaj mniej ostry, a myszy mogą żyć w przybliżeniu w normalnej długości życia w porównaniu z Sgcd2 /. myszy, które wykazują bardziej poważną chorobę z przedwczesną śmiercią (23, 24). W tym miejscu przekroczyliśmy transgen SERCA1 w tle genetycznym mdx i podobnie do tego, co zaobserwowaliśmy w Sgcd A /. tło, zarówno histologiczne, jak i biochemiczne markery MD zostały dramatycznie zmniejszone (ryc. 3A). W wieku 6 tygodni i 3 miesięcy centralne zarodkowanie miofibry było znacznie zmniejszone w mięśnie czworogłowym, przeponie i płaszczce (ryc. 3, B i D). W rzeczywistości, w wieku 6 tygodni, centralne zarodkowanie miofibry zostało niemal ugaszone we wszystkich trzech analizowanych mięśniach (ryc. 3B). Podczas gdy zwłóknienie staje się zwykle widoczne tylko u starszych myszy mdx, nawet łagodny stopień włóknienia tkanki, który zaczyna się rozwijać w wieku 6 tygodni i 3 miesięcy, był znacząco zmniejszony w mięśniach szkieletowych myszy SERCA1 / mdx (Figura 3, C i E). Ostatecznie, poziomy CK w surowicy po 3 miesiącu życia również zmniejszyły się około 4-krotnie u myszy SERCA1 / mdx w porównaniu z myszami mdx (Figura 3F). Wyniki te dodatkowo potwierdzają wniosek, że zwiększona ekspresja SERCA1 może łagodzić histopatologię i cechy biochemiczne MD w mysich modelach choroby. Figura 3SERCA1 łagodzi biochemiczne i histologiczne cechy MD u myszy mdx. (A) Sekwencje histologiczne H & E i Massona z trichromem wybarwione z mięsień czworogłowy myszy WT, mdx i mdx-SERCA1 Tg w 3 miesiącu życia. Oryginalne powiększenie, × 200. (B i D) Procent miamerów z centralnie zlokalizowanymi jądrami u myszy mdx i mdx-SERCA1 Tg w wieku 6 tygodni i 3 miesięcy. (C i E) Śródmiąższowe zwłóknienie w skrawkach histologicznych mięśni analizowano przy użyciu oprogramowania do analizy metamorficznej u myszy mdx i mdx-SERCA1 Tg w wieku 6 tygodni i 3 miesięcy. Liczba myszy użytych do oceny ilościowej jest pokazana na wykresach. (F) Oznaczenie ilościowe poziomów CK w surowicy u myszy mdx i mdx-SERCA1 Tg w 3 miesiącu życia. * P <0,05 versus mdx. Liczba użytych myszy jest pokazana na wykresach. Nadekspresja SERCA1 poprawia charakterystykę MD u myszy Tg z nadekspresją TRPC3. Wykazaliśmy, że specyficzna dla mięśni szkieletowych nadekspresja kanału jonowego TRPC3 była wystarczająca do wywołania choroby mięśni szkieletowych, która była całkowicie zgodna z MD (10). Uważa się, że kanały TRPC przyczyniają się do napływu Ca2 + w MD związanej z destabilizacją sarkolemy. Istotnie, nadekspresja dominującego negatywnego białka TRPC6 zmutowanego w mięśniu szkieletowym blokowała aktywność przeciekania Ca2 + sarkolemmy i znacznie zmniejszone objawy choroby MD w mdx i Sgcd2 /. myszy (10). Tutaj krzyżowaliśmy krzyżowo myszy Tg TRPC3 i nadeksprymujące SERCA1, aby bardziej bezpośrednio zbadać hipotezę Ca2 +,. ponieważ jedynym efektem wywołującym chorobę związanym z transgenem TRPC3 jest napływ Ca2 +. Zgodnie z przewidywaniami, barwienie H & E mięśnia czworogłowego i mięśnia płaszczkowatego wykazało znacznie mniejszą histopatologię tkanki w wieku 3 miesięcy u myszy SERCA1 / TRPC3 Tg w porównaniu z myszami TRPC3 Tg (Figura 4A). Na przykład, ocena ilościowa centralnie położonych miowłókien wykazała znaczące zmniejszenie u myszy SERCA1 / TRPC3 Tg w porównaniu z myszami TRPC3 Tg (Figura 4B). Wyniki te dodatkowo potwierdzają hipotezę, że nadekspresja SERCA1 jest ochronna, zwiększając manipulację SR Ca2 + i przeciwdziałając efektowi zwiększonego przecieku Ca2 + w MD. Figura 4SERCA1 łagodzi histologiczne cechy MD u myszy TRPC3 Tg. (A) Reprezentatywne histologiczne barwienie H & E z mięsień czworogłowy TRPC3 Tg i TRPC3 / SERCA1 podwójne Tg w 3 miesiącu życia. Oryginalne powiększenie, × 200. (B) Procent miofibrów z jądrem centralnie zlokalizowanym w mięsień czworogłowy i płaszczkowaty z myszy TRPC3 Tg i TRPC3 / SERCA1 podwójnych Tg [patrz też: polipy woreczka żółciowego, prohormony skutki uboczne, błonnik witalny gdzie kupić ] [przypisy: u bogdana, lowisko zgoda, sprzęt rehabilitacyjny dla dzieci ]