Skip to content

Zmniejszenie dystrofii mięśniowej u myszy poprzez nadekspresję SERCA w mięśniach szkieletowych ad

2 miesiące ago

310 words

Skrawki histologiczne H & E i Massona z trichromem nie wykazywały cech patologicznych w mięśniach myszy T1 SERCA1 w porównaniu z myszami z miotu innego niż Tg, chociaż obszary przekroju włókien były nieznacznie zmniejszone (Figura 1B). Następnie, wywołane elektrycznie stany Ca2 + oceniano w ostrych izolowanych włóknach Flexor digitorum brevis (FDB) w celu określenia, czy nadekspresja SERCA1 sprzyja obciążeniu SR i zwiększonemu klirensu Ca2 +. Zgodnie z przewidywaniami, szczytowe amplitudy Ca2 + były znacząco zwiększone, a czas do zaniku przejściowego Ca2 + był zmniejszony (Figura 1, C, E i F). Co ciekawe, spoczynkowy stosunek Ca2 + był również znacząco zmniejszony we włóknach FDB izolowanych z myszy SERCA1 Tg w porównaniu z myszami z miotu innego niż Tg (Figura 1D). Podsumowując, wyniki te pokazują, że nadekspresja SERCA1 w mięśniach szkieletowych poprawia klirens Ca2 + i cyklizację. Jednak poziomy ekspresji kluczowych białek manipulujących receptorem Ca2 + nie uległy istotnej zmianie w transgen SERCA1, co oceniono na podstawie ilościowej analizy Western blotting (Suplementowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10,1172 / JCI43844DS1). Figura Nadekspresja SERCA1 w mięśniach szkieletowych zwiększa cykliczność Ca2 + podczas sprzężenia EC. (A) Analiza Western blot dla ekspresji SERCA1 w różnych grupach mięśni izolowanych z myszy nie-Tg (NTg) i SERCA1 Tg (Tg) w wieku 3 miesięcy. Quad, mięsień czworogłowy; Gaz, brzuchaty łydki; Diaph, przepona. (B) Sekcje trichromii H & E i Massona z mięśnia czworogłowego. Oryginalne powiększenie, × 200. (C) Reprezentatywne ślady zapisów współczynnika fluorescencji F340 / F380 z pojedynczych miofibrów FDB izolowanych z myszy NTg i SERCA1 Tg w odpowiedzi na stymulację elektryczną. (D) Odpowiedni stosunek Ca2 +, (E) stała czasowa zaniku (.) I (F) szczytowa przejściowa amplituda Ca2 + w izolowanych miamałach ze wskazanych genotypów. * P <0,05 w porównaniu z myszami NTg; n = całkowita liczba włókien zarejestrowanych dla 4 zwierząt w każdym genotypie pokazanym na wykresach, D. F. Nadekspresja SERCA1 polepsza MD w myszach zerowych .-sarkoglikanu. Aby ocenić potencjalny korzystny wpływ nadekspresji SERCA1 w kontekście MD, przeszliśmy przez transgen SERCA1 do tła genetycznego P-sarkoglikanu (Sgcd A / P), z którego ostatni jest modelem mysim z piorunującą chorobą dystroficzną (23; 24). Obecność transgenu SERCA1 spowodowała znaczącą redukcję w histopatologii w Sgcdp / l. myszy w wieku 6 tygodni, 3 miesięcy i 6 miesięcy, wykazujące znaczne zmniejszenie miowłókien z centralnie zlokalizowanymi jądrami i ogólnymi wskaźnikami zwłóknienia w porównaniu z Sgcd2 /. tylko kontrole (ryc. 2, A. F). Ponadto, poziomy kinazy kreatynowej (CK) w surowicy były znacznie zmniejszone w Sgcd2 /. myszy z transgenem SERCA1 w porównaniu z Sgcd2 /. sąsiadki (rysunek 2H). Związany z tym udoskonaleniem histopatologii, Sgcd2 /. myszy z transgenem SERCA1 wykazały przywrócenie zdolności do biegu na bieżni porównywalnej z myszami kontrolnymi WT, podczas gdy Sgcd. /. same myszy były poważnie zagrożone (Figura 2G). Zbadaliśmy również, czy transfekcja SERCA1 w Sgcd A / . wpłynęła na szybkość rozerwania sarkseli, a następnie na wychwyt niebieskiego barwnika Evansa (EBD). myszy. Zwykle włókna mięśniowe od Sgcd. /. myszy wykazują wychwyt EBD po wstrzyknięciu ogólnoustrojowym z powodu pęknięć błony, co zaobserwowano tylko w mięśnie czworogłowe, brzuchatym łydki, piszczelowej przedniej (TA) i przeponie z myszy kontrolnych bez null (Figura 2, I i J). Jednak obecność transgenu SERCA1 równomiernie zmniejszała całkowity wychwyt EBD w Sgcd A / l. myszy od 3 do 5 razy (Figura 2, I i J). Interpretujemy tę redukcję wychwytu EBD z transgenem SERCA1 w wyniku zwiększonego wychwytu zwrotnego Ca2 +, co prawdopodobnie zmniejsza wytwarzanie reaktywnego tlenu z błoną i mitochondriami, co może wtórnie zmniejszać stres błonowy i przypuszczalny mechanizm przekazywania choroby do przodu (patrz dyskusja). Mięsień płaszczkowaty nie ulegał różnym wpływom, prawdopodobnie dlatego, że jest to mięsień postawowy, który zawsze znajduje się pod napięciem / użyciem (ryc. 2J). Figura 2SERCA1 łagodzi biochemiczne i histologiczne cechy MD w Sgcd. /. myszy. (A) Sekwencje czworogłowego śledziony H & E i Massona z myszy WT, Sgcdp / a, i Sgcdp / P-SERCA1 Tg w 3 miesiącu życia. Oryginalne powiększenie, × 200. (B i D) Procent miofibrów z centralnie zlokalizowanymi jądrami w Sgcd A /. i myszy Sgcdp / P-SERCA1 Tg w wieku 6 tygodni i 3 miesięcy. (C, E i F) Śródmiąższowe zwłóknienie w skrawkach histologicznych mięśni analizowane przy użyciu oprogramowania do analizy metamorficznej w Sgcd. /. i myszy Sgcdp / p-SERCA1 Tg w wieku 6 tygodni, 3 miesięcy i 6 miesięcy [patrz też: sprzęt rehabilitacyjny dla dzieci, nefrolog dziecięcy wrocław, mozga kanaryjska gdzie kupić ] [podobne: łowisko mąkolno, łowisko u bogdana, łowisko u roberta ]