Skip to content

Zgodne dane dotyczące morfologii i ekspresji genów pokazują, że szczepionka zatrzymuje zmiany przednowotworowe HER-2 / neu ad

2 miesiące ago

753 words

W niniejszym artykule wykazano, że priming DNA i wzmocnienie komórek allogenicznych uwalniających IFN-y zatrzymuje progresję karcynogenezy sutka u myszy BALB-neuT. Metody Myszy. Myszy żeńskie BALB-neuT (H-2d) nadeksprymujące onkogen rHER-2 / neuT pod kontrolą promotora wirusa raka sutka myszy (5) hodowano w warunkach wolnych od patogenów przez Charles River Italia SpA (Calco, Włochy). Myszy myszy BALB / c dla genu Ig. -Chain, dostarczone przez Thomasa Blankensteina (Free University of Berlin, Germany) (17), krzyżowano z BALB-neuT (BALB-neuT / aKO) i poddawano selekcji przez analizę PCR. Tylko indywidualnie oznakowane dziewicze samice myszy były stosowane i traktowane zgodnie z wytycznymi Wspólnoty Europejskiej. Gruczoły sutkowe badano raz w tygodniu, aby zauważyć wygląd guza. Masy nowotworowe mierzono następnie za pomocą suwmiarki o dwóch prostopadłych średnicach i rejestrowano średnią wartość. Stopniowo rosnące masy o średnicy większej niż mm uznawano za nowotwory. Różnice w częstości występowania guza oceniano za pomocą testu log-rank Mantela-Haenszela i różnic w krotności guza z testem testowym. Komórki. Klony komórek N202.1A i N202.1E uzyskano z raka gruczołu sutkowego FVB-neuN no. 202 myszy (H-2q), transgenicznych dla rHER-2 / neu (15, 17). Obydwa klony wykazują wysokie poziomy H-2q klasy I, ale nie glikoproteiny klasy II. Klony N202.1A eksprymują wysoce ekspresyjną membranę rp185neu, podczas gdy klony N202.1E to rp185neu .. Komórki N202.1A stabilnie transfekowano przez wytrącanie fosforanem wapnia wektorem plazmidowym niosącym mysie IFN-y. gen wcześniej opisany (16). p185neu / alloq-IFN. komórki wyprodukowały 700 ng / ml IFN-y na 24 godziny z × 105 zaszczepionych komórek. Klon komórek TUBO pochodzi z gruczołu sutkowego myszy BALB-neuT (H-2d) (7). Komórki te wyrażają wysokie poziomy zarówno rp185neu, jak i ID klasy, ale nie klasy IId, glikoproteiny, jak opisano wcześniej szczegółowo (7). Komórki hodowano w DMEM (BioWhittaker Inc., Walkersville, Maryland, USA) uzupełnionym 10% FBS (Life Technologies Inc., Mediolan, Włochy) w 37 ° C w wilgotnej atmosferze 5% CO2. Zalej i wzmocnij szczepienia. Wektor pcDNA3 kodujący TM-ECD rp185neu został wytworzony zgodnie z opisem (7, 11). Wytrącono go, zawieszono w jałowym roztworze soli fizjologicznej o stężeniu mg / ml i przechowywano w porcjach w temperaturze około 20 ° C do stosowania w protokołach immunizacyjnych. 100 .l tego roztworu (100 .g DNA) wstrzyknięto w chirurgicznie odsłonięte mięśnie czworogłowe znieczulonych myszy w 10 i 12 tygodniu. W 13 tygodniu życia myszy otrzymały dootrzewnowe doładowanie z 2 x 106 p185neu / alloq- IFN. komórki w 0,2 ml PBS. Analiza morfologiczna i immunohistochemiczna. Grupy trzech myszy uśmiercono we wskazanym czasie, a tkankę sutkową poddano obróbce w sposób opisany uprzednio (8, 10) w celu analizy histologicznej, immunohistochemicznej i całego zestawu (http://ccm.ucdavis.edu/tgmouse/HistoLab/wholmt1). .htm). Komórki plazmatyczne zliczano pod mikroskopem o polu widzenia 400 × (0,180 mm2) w dziesięciu losowo wybranych polach z każdej próbki gruczołu sutkowego (dziesięć próbek gruczołu sutkowego na mysz). Obserwacje morfologiczne były prowadzone niezależnie przez trzech patologów w sposób ślepy. Różnice w liczbie komórek plazmatycznych oceniano za pomocą dwustronnego testu dla ucznia. Odpowiedź przeciwciał. Surowice zebrane od myszy w 14 tygodniu życia analizowano za pomocą cytometrii przepływowej, jak opisano (7, 15). W skrócie, rozcieńczenia 1:20 surowic w PBS-azydku-BSA inkubowano z 2 x 105 N202.1A p185neu + lub N202.1E p185neu. komórki przez 45 minut w 4 ° C. Po płukaniu komórki inkubowano przez 30 minut ze szczurzym sprzężonym z biotyną Ab anty-mysim całkowitym Ig, IgA, IgM, IgGl, IgG2a, IgG2b, IgG3 (Caltag Laboratories Inc., Burlingame, California, USA), a następnie przez 30 minut. minuty przy użyciu 5 ul streptawidyny-fikoerytryny (streptawidyna-PE) (DAKO A / S, Glostrup, Dania), ponownie zawieszono w PBS-azydku-BSA zawierającym mg / ml jodku propidyny i oceniono w FACScan (Becton Dickinson Immunocytometry Systems , Mountain View, Kalifornia, USA). Specyficzny potencjał wiązania surowicy N202.1A (sbp) obliczono następująco: [(% komórek dodatnich z surowicą testową) (średnia fluorescencji)]. [(% komórek dodatnich z surowicą kontrolną) (średnia fluorescencji)] × rozcieńczenie surowicy (22). W każdej ocenie analizowano x 104 żywotnych komórek. Test cytotoksyczności. Komórki śledziony (Spc; x 107) od obu szczepionych myszy TM-ECDa i myszy z pierwotnym i wzmocnionym stymulowano przez 6 dni 5 x 105 traktowanych mitomycyną C (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) Komórki TUBO w obecności 10 U / ml szczurzego IL-2 (Eurocetus, Mediolan, Włochy) i badano w 48-godzinnym oznaczeniu uwalniania [3H] TdR w stosunku komórek efektorowych / docelowych TUBO od 50: do 6: w okrągłodenne 96-dołkowe płytki do mikromiareczkowania w trzech powtórzeniach
[patrz też: łowisko u roberta, mozga kanaryjska gdzie kupić, nfz poznań piekary godziny otwarcia ]
[hasła pokrewne: lowisko zgoda, sprzęt rehabilitacyjny dla dzieci, sezam właściwości lecznicze ]