Skip to content

Spontaniczne zapalenie nerwu wzrokowo-kręgowego mózgu w modelu transgenicznego mysiej autoimmunizacji komórek T / komórek B ad 7

4 tygodnie ago

670 words

Co więcej, dystrybucja akwaporyny w ludzkim OUN nie pokrywa się z rozkładem zmian demielinizacyjnych w chorobie Devic (39, 40). Myszy OSE oferują ważne nowe funkcje, które sprawią, że będą wykorzystywane do wielu celów. Co najciekawsze, mogą poddać się badaniu mechanizmów, które wytrącają spontaniczną chorobę autoimmunologiczną. Myszy OSE mogą być również przydatne do badania czynników determinujących lokalizację zmian i ich skład komórkowy. Wreszcie, jako model spontanicznej, autoimmunologicznej indukowanej bez adiuwantu, myszy OSE mogą być pomocne w przedklinicznej walidacji nowych terapii autoimmunologicznej choroby OUN. Metody Zwierzęta i ocena choroby. Transgeniczny IgHMOG (określany również jako Th, odnośnik 8), TCRMOG (określany również jako 2D2, odnośnik 5) i MOG. /. myszy (10) wraz z myszami C57BL / 6 hodowano w obiektach dla zwierząt w Instytucie Biochemii im. Maxa Plancka. Myszy TCRMOG wygenerowano bezpośrednio na podłożu genetycznym C57BL / 6 (5). IgHMOG i MOG. /. myszy pierwotnie wytworzono stosując komórki ES pochodzące z 129, ale krzyżowano wstecznie ze szczepem C57BL / 6 przez więcej niż 12 i 8 pokoleń, odpowiednio. Homozygotyczne myszy TCROVA (n = 6) zakupiono w Jackson Laboratory. Zwierzęta F1 uzyskane z krzyżówki IgHMOG z myszami TCRMOG lub TCROVA zważono i badano co 2-3 dni pod kątem klinicznych objawów choroby. Ocena kliniczna zwierząt była zgodna z klasycznym określeniem choroby EAE: 0, zdrowe zwierzę; 1, zwierzę ze zwiotczałym ogonem; 2, zwierzę z zaburzonym odruchem prostującym i / lub chodem; 3, zwierzę z sparaliżowaną tylną nogą; 4, zwierzę z sparaliżowanymi obiema łapami; 5, konające zwierzę lub śmierć zwierzęcia po poprzedzającej chorobie klinicznej. Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zastosowane w tym raporcie były zgodne z wytycznymi komisji ds. Zwierząt Instytutu Neurobiologii im. Maxa Plancka oraz z licencją Regierung von Oberbayern (Monachium, Niemcy). Antygeny. rMOG oczyszczono z ciał inkluzyjnych bakterii (41). W BioTrend, Niemcy, zsyntetyzowano peptyd MOG.35-55. Immunizacja zwierząt. Myszom wstrzykiwano sc na podstawie ogona emulsją równych ilości CFA i 200 .g MOG aa 35-55 w PBS. CFA uzupełniono 5 mg / ml Mycobacterium tuberculosis (szczep H37Ra). Toksynę krztuścową (400 ng) wstrzyknięto ip w dniach 0 i 2 w stosunku do immunizacji. Analiza histologiczna. Zwierzęta perfundowano 4% paraformaldehydem w PBS, przechowywano w tym samym środku utrwalającym przez 24 godziny, a następnie przemyto dwukrotnie PBS. Mózg i tkankę rdzenia kręgowego wycięto i częściowo zatopiono w parafinie lub szybko zamrożono w celu uzyskania immunocytochemii. Sąsiednie sekcje seryjne barwiono za pomocą impregnacji srebrem H & E, luxol fast blue lub Bielschowsky. Immunohistochemia. Barwienie immunohistochemiczne przeprowadzono w sposób opisany uprzednio (42). Skrawki tkanek (8. 12. M) inkubowano z pierwszorzędowymi przeciwciałami szczurzymi rozpoznającymi mysie CD4, CDllb, CD8a, IgM, CD19 lub B220 (wszystkie otrzymane z BD Biosciences. Pharmingen). Wtórne biotynylowane przeciwciało anty-szczurze, kompleks streptawidyna-HRP (oba z Vector Laboratories) i diaminobenzydyna (Zymed) pozwoliły na specyficzne dla komórek wykrywanie komórek jednojądrzastych. Preparaty zostały wybarwione kontrastowo hematoksyliną Meyera i osadzone w AquaMount (Fisher Scientific) przed analizą mikroskopową. Analiza cytometrii przepływowej. Jednojądrzaste komórki izolowano z OUN przez wirowanie w gradiencie Percollu. W celu wykrycia markerów powierzchni komórki metodą analizy FACS komórki barwiono przeciwciałami znakowanymi fluorochromem (BD Biosciences. Pharmingen, patrz Dodatkowe Metody dla szczegółów). Komórki wiążące MOG wykryto za pomocą biotynylowanego białka rMOG (41) i kompleksu streptawidyna-allofikocyjanina (BD Biosciences. Pharmingen). Wewnątrzkomórkowe barwienie Foxp3 przeprowadzono zgodnie z instrukcjami producenta (eBioscience). Akwizycję danych przeprowadzono za pomocą systemu FACSCalibur i oprogramowania CellQuest (BD). Do analizy danych wykorzystano oprogramowanie CellQuest i oprogramowanie WinMDI (wersja 2.8, http://facs.scripps.edu/software.html). Test proliferacji in vitro. Przygotowano zawiesiny pojedynczych komórek ze śledziony i 2 x 105 komórek / studzienkę posiano na 96-studzienkowych, okrągłodennych płytkach w całkowitej objętości 200 ul kompletnej pożywki RPMI zawierającej 10% FCS (Invitrogen). Po okresie hodowli trwającym 48 godzin na studzienkę dodano tymidynę znakowaną 1Ci 3H. Próbki zebrano 16 godzin później i zmierzono inkorporację trytu. Każdą próbkę przeprowadzono trzykrotnie. Oczyszczanie komórek
[podobne: herbata czarna właściwości, na czym polega rezonans magnetyczny, nefrolog dziecięcy wrocław ]
[patrz też: dieta montignaca przepisy, ciśnienie atmosferyczne a samopoczucie, biedronka świątniki górne ]