Skip to content

Skierowanie na fibroblasty związane z nowotworem poprawia chemioterapię raka poprzez zwiększenie wewnątrznormalnego poboru leku cd

4 tygodnie ago

1 words

P <0,01. (C) Ustawienie terapeutyczne. Myszy BALB / c (n = 8) wstrzyknięto dożylnie 105 komórkom CT26, a następnie zaszczepiono po 3 i 10 dniach po stwierdzeniu przerzutów do płuc. Po 18 dniach zważono płuca (lewy panel, średnia . SEM), przebadano pod kątem przerzutów i oceniano wzrokowo (prawy panel), oceniając procent powierzchni płuca pokrytego przerzniętymi przerzutami w następujący sposób: 0 = 0%, = <20%, 2 = 20 ~ 50%, 3 => 50%. * P <0,01. Szczepionka przeciwko FAP zmniejsza wzrost ustalonych przerzutów w warunkach terapeutycznych. W celu ustalenia, czy szczepionka FAP może również hamować wzrost guza w warunkach terapeutycznych ustalonych doświadczalnych przerzutów, myszy BALB / c prowokowano dożylnie x 105 komórek raka okrężnicy CT26, a następnie zaszczepiono w dniach 3 i 10 po tym czasie. Zaobserwowaliśmy znaczący spadek masy płucnej nowotworu u myszy zaszczepionych pFap w porównaniu z grupą kontrolną, która wykazywała rozległe przerzuty i wykazywała ciężkie oznaki kacheksji guzów 18 dni po inokulacji komórek nowotworowych (Figura 2C). Myszy w grupie pFap wykazywały również znaczny spadek przerzutów na powierzchni płuc, co wykazano przez odpowiednie wyniki przerzutu (Figura 2C). Limfocyty T CD8 + pośredniczą w skutecznej przeciwnowotworowej odpowiedzi immunologicznej. W celu określenia, która populacja komórek efektorowych odpowiada za obserwowaną przeciwnowotworową odpowiedź immunologiczną, prowokowaliśmy myszy, które były immunizowane dożylnie 3 razy w odstępach tygodnia z x 105 komórek CT26 i zubożały odpowiednie komórki efektorowe podczas fazy efektorowej przeciwciałami przeciwko CD4 + lub limfocyty T CD8 +, jak również komórki NK (Figura 3A). Udało nam się ustalić decydującą rolę dla limfocytów T CD8 +, jak wcześniej zaobserwowaliśmy w podobnej próbie z inną szczepionką opartą na DNA (26). Deplecja komórek CD4 + i komórek NK nie zmniejszyła skuteczności naszej szczepionki. Figura 3 Przeciwnowotworowe efekty szczepionki są mediowane przez limfocyty T CD8 +. (A) Wpływ na długość życia zależnego od przeciwciał wyczerpania podczas fazy efektorowej u szczepionych myszy (3 razy w odstępach 1-tygodniowych) poddano prowokacji iv 105 komórkami CT26. (B) Komórki T CD8 + oczyszczono ze śledziony zaszczepionych myszy, stymulowano komórkami docelowymi nowotworu a-a, a następnie inkubowano przez 48 godzin z komórkami CT26 transfekowanymi GFP lub GFP / PFap. Apoptozę jąder oceniano przez barwienie barwnikiem Hoechst 33342 w następujący sposób: stadium 0 apoptozy jądrowej, brak apoptozy; etap 1, kondensacja chromatyny na dużą skalę; etap 2a, fragmentacja chromatyny; etap 2b, ciałka apoptotyczne. (C i D) Splenocyty z immunizowanych myszy pFap i pustych wektorów (n = 3) stymulowano przez 5 dni fibroblastami A31 transfekowanymi pFap, a następnie poddawano testowi uwalniania 51Cr. (D) Komórki efektorowe i docelowe koinkubowano z przeciwciałami anty-MHC klasy I (średnia . SD). (E) Analiza FACS zawiesin pojedynczych komórek nowotworów CT26 szczepionych myszy (n = 2) wybarwionych przeciwciałami anty-CD3 + PerCP-Cy5.5 i anty-CD8 + FITC. Przedstawiono jedno z dwóch eksperymentów. (F) Reprezentatywne wycinki guzów CT26 u myszy zaszczepionych pFap i wektora pustego. Barwionych przeciwciałami anty-CD8 + FITC i plamą jądrową DAPI. * Statystycznie istotne w porównaniu z grupą wektorową, P <0,01. ** Statystycznie istotny w porównaniu z pustym wektorem, P <0,05. Aby ocenić, czy szczepienie szczepionką FAP opartą na DNA jest zdolne do zerwania obwodowej tolerancji komórek T przeciwko temu samemu antygenowi, oczyszczono komórki T CD8 + od zwierząt zaszczepionych wektorami kodującymi pusty wektor lub FAP. Następnie stymulowaliśmy te komórki komórkami docelowymi dla nowotworu a-y i inkubowano je z komórkami docelowymi z żywym nowotworem, które przejściowo transfekowano albo GFP jako kontrolą, albo GFP plus pFap. Jak pokazano (Figura 3B), tylko komórki T CD8 + oczyszczone od myszy zaszczepionych pFap były zdolne do indukowania apoptozy jądrowej, jak oceniono przez barwienie komórek docelowych transfekowanych pFap barwnikiem Hoechst 33342. Splenocyty immunizowanych myszy stosowano również w konwencjonalnym teście uwalniania 51Cr. W tym celu limfocyty śledzionowe myszy immunizowanych pFap i pustym wektorem inkubowano przez 5 dni z fibroblastami A31 poddanymi promieniowaniu A, które zostały zainfekowane retrowirusowo pFap. Pobudzone splenocyty następnie inkubowano przez 4 godziny ze znakowanymi komórkami A31-pFap i obliczono procent lizy. Splenocyty od myszy zaszczepionych pFap były w stanie zlizować znacznie więcej fibroblastów niż te z kontroli z pustym wektorem w stosunku docelowym do efektora 1: 100 i 1:25 (Figura 3C). [przypisy: łowisko u roberta, nfz poznań piekary godziny otwarcia, biustonosze na duzy biust ] [patrz też: jak naturalnie rozjaśnić włosy, nefrolog dziecięcy wrocław, dieta montignaca przepisy ]