Skip to content

Skierowanie na fibroblasty związane z nowotworem poprawia chemioterapię raka poprzez zwiększenie wewnątrznormalnego poboru leku ad 8

1 miesiąc ago

635 words

Komórki również koinkubowano z przeciwciałami anty-MHC klasy I (BD Biosciences) w stężeniu 10 .g / ml. Immunohistochemia i infiltracja komórek T. Kriosekcje (8 .m) guzów utrwalono w acetonie. Po inkubacji z pierwszorzędowym przeciwciałem, poliklonalnym króliczym anty-mysim przeciwciałem FAP (dostarczonym przez JD Cheng) lub poliklonalnym króliczym anty-mysim kolagenem typu I (Chemicon International), skrawki wybarwiono immunologicznie zgodnie z protokołem producenta ( Uniwersalne pojedyncze odczynniki LSAB 2, peroksydaza; Dako). W przypadku ogniskowej mikroskopii, unieruchomione krioskrawki barwiono anty-mysim przeciwciałem CD8, biotynylowanym anty-szczurzym Ig wtórnym przeciwciałem i znakowaną FITC streptawidyną (BD Biosciences) i poddawano działaniu DAPI (Sigma-Aldrich). Do uzyskania obrazów, które zostały przetworzone przy użyciu oprogramowania Zeiss LSM Image Examiner, użyto skaningowego mikroskopu skaningowego Tęczowy laserowy Bio-Rad (Zeiss) 2100. W celu analizy infiltracji komórek T przez FACS myszy BALB / c (n = 6) immunizowano 3 razy w cotygodniowych odstępach pFap lub pustym wektorem. Tydzień po ostatniej immunizacji zwierzęta poddano prowokacji sc za pomocą komórek nowotworowych 3 x 105 CT26. Guzy zebrano 3 tygodnie później i przygotowano zawiesiny pojedynczych komórek przez inkubację pokrojonej tkanki nowotworowej przez 45 minut w pożywce uzupełnionej kolagenazą typu I (125 U / ml, Invitrogen). Po przesączeniu komórki 2 myszy połączono, wybarwiono anty-CD3 + PerCp-Cy5.5 i anty-CD8 + FITC (BD Biosciences) i analizowano metodą FACS. Wewnątrzoporny wychwyt fluoresceiny, błękitnej albuminy Evansa, 14-C-5-fluorouracylu i doksorubicyny. Dziesięć dni po ostatnim z 3 szczepień w odstępach 1-tygodniowych myszy prowokowano myszom 3 × 104 komórek CT26 na lewym przednim boku. Dziewiętnaście dni później myszom podano zastrzyki 1% fluoresceiny sodu (Sigma-Aldrich) ip przy 12 .l / g wagi ciała, 100 .l błękitnej albuminy Evansa (Sigma-Aldrich) iv lub 2,5 CiC 14C-5- fluorouracyl (Sigma-Aldrich) iv Po odpowiednio 5 minutach, 30 minutach lub godzinie myszy zabito w celu określenia absorpcji lub scyntylacji supernatantów homogenatów nowotworów przy 490 nm, przy 612 nm lub w liczniku gamma, odpowiednio. W celu określenia pobrania dogalubiny do guza, myszy BALB / c (n = 4) poddano prowokacji sc z 5 x 105 komórek D2F2 w prawym boku. Doksorubicynę wstrzyknięto dożylnie 16 dni później (10 mg / kg), a guzy zebrano 45 minut później. Próbki przygotowano jak opisano uprzednio (46) i zmierzono względem wewnętrznego standardu daunorubicyny stosując kolumnę ZORBAX Eclipse XDB-C8 w systemie 1100 serii chromatografii cieczowej z spektrometrią masową (LC-MS) (Agilent Technologies). Ocena skutków ubocznych. W celu określenia jakiegokolwiek szkodliwego wpływu na gojenie się ran, dokonano zranienia, jak opisano wcześniej (47, 48). Zadaliśmy kolistą ranę o średnicy 3 mm przebiciem skóry (Miltex Inc.) na górnej części grzbietu myszy BALB / c (n = 4), 10 dni po ostatniej z 3 immunizacji w odstępach 1-tygodniowych i zmierzono czas do całkowitego zamknięcia rany. Do analizy histologicznej zadawaliśmy rany na zaszczepionych myszach 7, 14 i 21 dni przed badaniem. Biopsje skóry oraz 26 narządów i tkanek zbadano patologiem myszy. Statystyka. Statystyczne znaczenie zróżnicowanych wyników między grupami eksperymentalnymi i kontrolnymi określono za pomocą dwustronnego testu Student-owego. Znaczenie wyników przerzutów określono za pomocą testu U Manna-Whitneya. Znaczenie danych dotyczących przeżycia zostało określone przez test log-rank. Wyniki uznano za znaczące, jeśli wartości P były mniejsze niż 0,05. Podziękowania Dziękujemy Wei-Zenowi Wei, który uprzejmie zaopatrzył nas w mysie komórki raka sutka D2F2 oraz JD Cheng, który uprzejmie dostarczył cDNA dla mysiego FAP, jak również przeciwciało poliklonalne przeciw białku. Badanie to było wspierane przez dotację NIH CA83856 (na rzecz RA Reisfeld), dotację SFP1330 z Centrum Badawczego EMD Lexigen (do RA Reisfeld) i dotację Departamentu Obrony BC031079 (na RA Reisfeld). Przypisy Niestandardowe skróty: FAP, białko aktywujące fibroblast; pFap, pcDNA3.1 / V5-His-TOPO-Fap. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.116: 1955. 1962 (2006). doi: 10.1172 / JCI26532. Markus Loeffler i Jörg A. Krüger w równym stopniu przyczynili się do tej pracy.
[podobne: łowisko u roberta, sanatoria nad morzem nfz, leclerc godziny otwarcia ]
[patrz też: sezam właściwości lecznicze, biustonosze na duzy biust, polipy woreczka żółciowego ]