Skip to content

Czynnik transkrypcyjny Lm-homeodomena Lmx1b odgrywa kluczową rolę w podocytach

1 miesiąc ago

760 words

Pacjenci z zespołem rzepki paznokci często cierpią na nefropatię, która ostatecznie prowadzi do przewlekłej niewydolności nerek. Stwierdzenie, że ta choroba jest spowodowana przez mutacje czynnika transkrypcyjnego LMX1B, który w nerkach jest wyrażany wyłącznie w podocytach, oferuje możliwość lepszego zrozumienia patogenezy nerek. W naszej analizie nefropatii w zespole rzepki paznokciowej wykorzystaliśmy mysz z nokautem Lmx1b. Obrazy z transmisyjnego mikroskopu elektronowego wykazały, że rozwój kłębuszków w ogólności i różnicowanie podocytów w szczególności były poważnie upośledzone. Kapilarna sieć kłębuszkowa była słabo opracowana, w większości brakowało powierzchni w komórkach śródbłonka, a błona podstawna kłębuszków była rozdzielona. Ponadto podocyty zachowywały kształt prostopadłościanu i nie tworzyły procesów stóp i przepony szczelinowej. Ekspresja łańcucha .4 kolagenu IV i podociny również uległa znacznemu zmniejszeniu. Stosując testy przesunięcia żelowego, wykazaliśmy, że LMX1B wiąże się z dwiema bogatymi w AT sekwencjami w regionie promotorowym NPHS2, genu kodującego podocynę. Nasze wyniki wskazują, że Lmx1b reguluje ważne etapy rozwoju kłębuszków nerkowych i ustanawia związek między trzema dziedzicznymi chorobami nerek: zespołem paznokciowo-rzęskowej (Lmx1b), opornym na steroidy zespołem nerczycowym (podocin) i zespołem Alporta (kolagen IV. 4). Wstęp Zespół paznokcia-rzepki (zwany również dziedziczną onycho-osteodysplazją) jest stosunkowo rzadką dziedziczną chorobą, która charakteryzuje się przede wszystkim gwoździami dysplastycznymi i brakiem lub niedorozwojem rzepki. Jedna trzecia do połowy pacjentów cierpi również na hematurię i białkomocz, a ostatecznie może nawet rozwinąć przewlekłą niewydolność nerek (1). W niektórych dotkniętych nerkach ogniskową stwardnienie kłębuszków nerkowych, zagęszczoną kłębuszkową błonę podstawną (GBM) i odlewy białkowe można już zobaczyć za pomocą mikroskopii świetlnej. Badanie mikroskopowe prawie zawsze ujawniło GBM, który zawiera zarówno wtrącenia fibrylarne, jak i obszary o jasnym świetle elektronów, a zatem prezentuje wygląd zjedzony przez mole (np. Odnośniki 2, 3). Chociaż jedna publikacja donosi o zwiększonym odkładaniu się fibrynogenu (4), a inna znajduje dowody na zmniejszone sieciowanie kolagenu IV (5), patogeneza fenotypu kłębuszkowego pozostaje niejasna. W 1998 r. Odnotowano pierwsze mutacje, które doprowadziły do rozwoju zespołu rzepki paznokci w genie LMX1B (6. 8). Odkrycia u pacjentów potwierdzają fakt, że inaktywacja Lmx1b u myszy prowadzi również do fenotypu silnie przypominającego zespół rzepki paznokciowej (9). Białko LMX1B zawiera dwie domeny LIM wiążące cynk na końcu NH2 i homeodomenę w środku; podczas gdy domeny Lin-11, Is1-1, Mec-3 (LIM) są odczuwane jako reprezentujące interfejs interakcji z innymi białkami, homeodomena jest odpowiedzialna za wiązanie z DNA. Opisane dotychczas mutacje prowadzą do nieobecności lub dezaktywacji homeodomeny, tak że zmutowane białko nie będzie już w stanie rozpoznać docelowych genów. Ponieważ opisano zmutowany gen LMX1B, który zawiera kodon stop w regionie kodującym pierwszą domenę LIM, a zatem powinien skutkować syntezą tylko bardzo krótkiego peptydu (8), dominującym negatywnym mechanizmem rozwoju zespołu jest mało prawdopodobne. Trzeba raczej przyjąć haploinsuficiency, co jednak kontrastuje ze stwierdzeniem, że u myszy oba allele genu Lmx1b muszą zostać dezaktywowane, aby wygenerować fenotyp (9). Wykorzystaliśmy te myszy z nokautem Lmx1b w celu lepszego zrozumienia fenotypu kłębuszkowego i wykazaliśmy związek między zespołem rzepki paznokci, zespołem Alporta i zespołem nerczycowym opornym na steroidy. Metody Zwierzęta nokautujące. Inaktywację mysiego genu Lmx1b osiągnięto przez zastąpienie egzonów 3-77 kasetą selekcyjną, w ten sposób usuwając region kodujący drugą domenę LIM, homeodomenę i domenę transaktywacji końcowej COOH (9). Myszy heterozygotyczne utrzymywano na podłożu C57BL / 6. Myszy homozygotyczne rodzą się w oczekiwanym stosunku mendeliańskim, ale nie przeżywają poza dniem po urodzeniu; dlatego w dniu urodzenia potomstwo zostało zabite przez dekapitację, a nerki zostały usunięte i przetworzone jak opisano poniżej. Mikroskopia elektronowa. W przypadku transmisyjnej mikroskopii elektronowej nerki utrwalono przez zanurzenie przez noc w × PBS / 2% aldehydem glutarowym, a następnie osadzono w Epon. Sekcje o grubości kilkudziesięciu nanometrów zostały użyte do transmisyjnej mikroskopii elektronowej. Barwienie kontrastowe przeprowadzono za pomocą osmu i octanu uranu. Morfometria. Aby określić obszar kłębuszków kłębuszkowych, nerki utrwalono 4 godziny w temperaturze pokojowej w x PBS / 4% paraformaldehydzie, a następnie osadzono w parafinie.
[przypisy: u bogdana, nefrolog dziecięcy wrocław, błonnik witalny gdzie kupić ]
[patrz też: na czym polega rezonans magnetyczny, błonnik witalny gdzie kupić, zatańcz ze mną cda ]