Skip to content

Czynnik transkrypcyjny Lm-homeodomena Lmx1b odgrywa kluczową rolę w podocytach czesc 4

1 miesiąc ago

775 words

Test ochrony z sondą skierowaną przeciwko 18S rRNA pokazuje, że stężenie RNA zostało określone prawidłowo (g). Słupek: 20 urn (a, b, e i f), 0,5 urn (c), 4 urn (d). Podocyty homozygotycznych myszy z knockoutem nadal były prostopadłymi i nie spłaszczały się nad GBM (Figura 2a). Nie zaobserwowano procesów stopowych i przepuklin szczelinowych nawet w najbardziej zaawansowanych kłębuszkach; sąsiadujące podocyty były raczej połączone strukturami przypominającymi połączenia adherenów (rysunek 2c). Ponadto GBM został podzielony (rysunek 2b), a materiał włóknisty, a nawet erytrocyty znaleziono w przestrzeni Bowmana i świetle sąsiednich części proksymalnych kanalików (ryc. 1b i 2d). Materiał włóknisty był prążkowany z częstotliwością około 17 nm (Figura 2e), co wskazuje, że stanowi on fibrynę (21). Figura 2 Różnicowanie pektyn w Lmxlb. /. myszy. Podocyty u nowonarodzonych homozygotycznych zwierząt z nokautem nie rozprzestrzeniają się nad GBM (strzałki), ale zachowują kształt prostopadłościanu (a). W wielu rejonach GBM zostało podzielone (b pokazuje przejście między jednowarstwowym GBM zaznaczonym strzałkami i podzielonym GBM zaznaczonym strzałkami). W żadnym kłębuszku nie zauważyliśmy procesów stóp i przepony szczelinowej, ale sąsiadujące podocyty zostały połączone strukturami przypominającymi połączenia adherenów (c; zanotuj płytki cytoplazmatyczne nakreślone strzałkami po obu stronach skrzyżowania). W niektórych kłębuszkach obserwowaliśmy również erytrocyty (E) i materiał włóknisty (strzałki) w przestrzeni Bowmana (d), które przy większym powiększeniu wykazały prążkowany wzór przypominający fibrynę (e). Pasek: 2 m (a), m (b i d), 100 nm (c i e). U ludzi zespół rzepki paznokci jest dziedziczony w sposób dominujący autosomalnie, ale nawet po roku nie wykryto żadnych nieprawidłowości morfologicznych w kłębuszkach heterozygotycznych myszy z nokautem Lmxlb (dane nie przedstawione). Konieczne będzie przeprowadzenie dodatkowych doświadczeń w celu ustalenia, czy rozmnażanie mutacji na innym tle da fenotyp u myszy heterozygotycznych. 3 Integrina, podokaleksyna i nefryna, ale nie podocina, są wyrażane przez podocyty Lmxlb. /. myszy. Brak procesów stóp i przepony szczelinowej skłonił nas do zbadania wzoru ekspresji białek powierzchniowych podocytów, które, jak wykazano, przyczyniają się do ustanowienia kłębuszkowej bariery filtracyjnej. Zarówno brak podjednostki integryny a3 (22), jak i brak wysoko naładowanej podokaliksiny białkowej (23) u myszy prowadzą do braku procesów na stopach. Jednakże dzięki immunohistochemii, integryna y3 i podokaliksyna wciąż mogą być łatwo wykryte w podocytach homozygotycznych myszy z nokautem (Figura 3, a (d). Mutacje w NPHS1, genie kodującym nefrynę, są odpowiedzialne za wrodzony zespół nerczycowy typu fińskiego (24). Nefiry są zlokalizowane w szczelinowej przeponie (11, 25, 26), a pacjenci z tą chorobą zwykle nie mają przepony szczelinowej (27). Dlatego było nieco zaskakujące, aby dowiedzieć się, że nefryn był nadal obecny w kłębuszkach Lmx1b. /. myszy (Figura 3, e i f). Figura 3 Ekspresja integryny a3, podokaleksyny i nefryny u noworodków Lmx1b. /. myszy. Za pomocą immunohistochemii, integryny a3 (aib), podokaliksiny (cid) i nefryny (e i f) wykryto w kłębuszkach myszy typu dzikiego (a, c i e) i homozygotycznych myszy z nokautem (b , d, i f). Immunohistochemiczne wykrywanie białek w aib wykonywano za pomocą DAB, w cf f przez fluorescencję. Pasek: 20 m (a. F). Wynik był bardzo różny, gdy zbadano wzór ekspresji podociny, która jest zmutowana u pacjentów z zespołem nerczycowym opornym na steroidy (28. 31). Podczas gdy białko podocyny można łatwo wykryć za pomocą immunohistochemii w kłębuszkach myszy typu dzikiego (Figura 4a), nie było go w kłębuszkach Lmxlbp./. myszy (Figura 4b). Ta różnica mogła być spowodowana zwiększoną niestabilnością białka z powodu braku procesów na stopach. Dlatego przeprowadziliśmy hybrydyzację in situ z antysensownym RNA podociny, aby określić, czy mRNA podociny był obecny w podocytach, ale nie byliśmy w stanie go znaleźć (ryc. 4, c i d). W celu potwierdzenia tych wyników histochemicznych, przeprowadzono test ochrony RNazą z RNA izolowanym z nowonarodzonych nerki myszy. Ponownie, nie wykryto żadnego mRNA podociny w nerkach Lmxlb. /. myszy (Figura 4e). Figura 4 Ekspresja podociny u noworodka Lmx1b. /. myszy. Białko podocyny (a) i mRNA (c) były obecne tylko w podocytach myszy typu dzikiego, a nie w myszach homozygotycznych z nokautem (b i d). Swoistość tych wyników została potwierdzona przez test ochrony RNazy z antysensownym RNA podociny, gdzie chronione prążki obserwowano tylko z RNA wyizolowanym z nerek myszy typu dzikiego (tRNA służyło jako kontrola negatywna)
[podobne: u bogdana, prohormony skutki uboczne, ciśnienie atmosferyczne a samopoczucie ]
[hasła pokrewne: mozga kanaryjska gdzie kupić, nfz poznań piekary godziny otwarcia, sanatoria nad morzem nfz ]