Skip to content

Czynnik transkrypcyjny Lm-homeodomena Lmx1b odgrywa kluczową rolę w podocytach ad 6

1 miesiąc ago

772 words

Po wywołaniu LMX1B wyraźne przesunięcie można rozpoznać po miejscu wiążącym w intronie COL4A4 i perfekcyjnym FLAT-F i niedoskonałych elementach FLAT-E (strzałki). Specyficzność przesunięcia można ocenić na podstawie supershifted band pojawiającego się po dodaniu anty-myc epitopowego przeciwciała 9E10 (grot strzałkowy w. Na + Ab. Lane). Wzorzec ekspresji związanego z cytoszkieletem aktyny. I białek błon komórkowych w kłębuszkach Lmx1b. /. myszy nokautujące. Nieobecność procesów podocytów w homozygotycznych myszach z nokautem Lmx1b mogła być również spowodowana defektem w aparacie cytoszkieletowym podocytów, i dlatego zbadaliśmy wzór ekspresji białek związanych z cytoszkieletem aktynowym, tj. Synaptopodyną i CD2AP. Synaptopodyna jest białkiem bogatym w prolinę, które zostało zlokalizowane w procesach podocytów i działa na włókna stresowe (13). Inaktywacja genu kodującego CD2AP prowadzi do zaniku procesu stopy, a wykazano również, że CD2AP oddziałuje z nefryną (34, 35). Oba białka były jednak obecne w kłębuszkach homozygotycznych myszy z nokautem (Figura 6, a (d), chociaż wydawało się, że sygnał był słabszy na tych odcinkach nerki. Test ochrony przed RNazą wykazał, że w nerkach Lmx1b. /. Obecne były w przybliżeniu jednakowe ilości CD2AP (Figura 6e), ale obniżone poziomy synaptopodyny (Figura 6f). myszy. Figura 6 Ekspresja białek związanych z cytoszkieletem aktyny i składników GBM u noworodka Lmx1b. /. myszy. Białka związane z cytoszkieletem aktyny. Synaptopodyna (a i b) i CD2AP (c i d) ulegają ekspresji w nerkach myszy typu dzikiego i homozygotycznych knockout. Test ochrony przed RNazą z 20 .g całkowitego RNA nerek wykazuje w przybliżeniu równe poziomy mRNA CD2AP (e), ale zmniejsza ilość mRNA synaptopodiny (Synpo) (f) u myszy z nokautem (tRNA służyło jako kontrola negatywna). Test ochrony z sondą skierowaną przeciwko rSNA 18S pokazano na Figurze 1. Komponenty GBM nidogen / entaktyna (g i h), fibronektyna (i i j) i dystroglikan (k i 1) można wykryć w nerkach dzikich zwierząt. -typowe i homozygotyczne myszy z nokautem. Immunohistochemiczne wykrywanie białek przeprowadzono za pomocą DAB (a (A, k i 1) i metodą fluorescencji (g | j). Bary: 20 m. Zmiany morfologiczne w GBM obserwowane u pacjentów z zespołem rzepki paznokci i w Lmx1b. /. myszy zasugerowały, że brakowało ważnych składników ECM. Zarówno nidogen / entaktyna (Figura 6, g i h), jak i fibronektyna (Figura 6, i oraz j) były jednak obecne w GBM homozygotycznych myszy z nokautem. Następnie zbadaliśmy dystroglikan, który został spekulowany jako ważny dla prawidłowego rozmieszczenia składników błon podstawnych (36), i ponownie nie stwierdziliśmy żadnej różnicy między myszami typu dzikiego i homozygotami z nokautem (Figura 6, k i 1). Innym ważnym składnikiem GBM jest kolagen IV. Podczas gdy potencjalny GBM zawiera łańcuchy .1 i 22 kolagenu IV, dodatkowa pod- stawka składająca się z łańcuchów a3, a4 i 55 jest dodawana przez podocyt (15). Mutacje w ostatnich łańcuchach kolagenu są odpowiedzialne za zespół Alporta, dziedziczną chorobę nerek, która ostatecznie prowadzi do przewlekłej niewydolności nerek (przegląd patrz odnośnik 37). Gdy zbadano ekspresję łańcucha IVA4 kolagenu w nerkach Lmxlb. /. myszy obserwowano wyraźną regulację w dół tej podjednostki (dane nieukazane), jak opisano w publikacji, która pojawiła się podczas przygotowania manuskryptu (38). Wzorzec ekspresji czynników transkrypcyjnych specyficznych dla podocytów. Ponieważ było oczywiste ze względu na charakterystykę morfologiczną i brak podociny i łańcucha IV. 4 kolagenu, że defekt rozwojowy w Lmx1b. /. myszy wpłynęły na linię podocytów, próbowaliśmy ustalić, czy te wady wynikały tylko z braku Lmx1b, czy też inne czynniki transkrypcyjne również odegrały rolę. Cynkowe białko palców C2H2 WT1 można już wykryć w kondensującej meszanomie metanowym, ale później ekspresja WT1 ogranicza się do podocytów (39). Jednakże nie zaobserwowano żadnej różnicy między nerkami myszy typu dzikiego i homozygotycznych z nokautem (fig. 7, aib). Figura 7 Ekspresja czynników transkrypcyjnych u noworodka Lmx1b. /. myszy. WT1 (a i b) i Foxc2 (cid) są wyrażane w nerkach myszy typu dzikiego i homozygotycznych knockout. Białko WT1 wykryto immunohistochemicznie za pomocą DAB, mRNA Foxc2 z nieradioaktywną hybrydyzacją in situ. Bar: 20 m. Inaktywacja genu Lmx1b prowadzi również do wad rozwojowych oczu. W obecności Lmx1b dwa czynniki transkrypcyjne uskrzydlonej rodziny helisy Foxc1 (zwane także Mf1, FREAC3 i FKHL7) i Foxc2 (zwane również Mfh1) nie występują w różnicującym podścielisku rogówki, natomiast w przypadku braku Lmx1b zarówno białka można wykryć w tej strukturze (40)
[więcej w: ciśnienie atmosferyczne a samopoczucie, lowisko zgoda, biedronka świątniki górne ]
[patrz też: łowisko u roberta, u bogdana, lowisko zgoda ]