Skip to content

Trombina aktywuje białko wiążące Y-Box (białko wiążące DNA B) w komórkach śródbłonka ad 8

1 miesiąc ago

664 words

Obecnie testujemy inne wektory ekspresyjne zawierające skrócone formy DBPB, ale żadna dotychczas nie indukowała aktywności promotora łańcucha pBB PDGF. Dowiedziono, że białka Y-box działają jako represory ekspresji genów (20, 21) i jako pozytywne regulatory konstytutywnej transkrypcji (22, 30). Jednakże, zgodnie z naszą wiedzą, nie wykazano wcześniej, że białka te są aktywowane przez pozakomórkowe bodźce w celu promowania indukowanej ekspresji genów. Pudełko Y składa się z odwróconej sekwencji pudełkowej CCAAT, która została po raz pierwszy zidentyfikowana jako sekwencja regulatorowa w promotorach genów MHC klasy II. Konsensusowy element Y został zdefiniowany przez analizę mutacyjną (29. 32). Chociaż uważa się, że konserwatywna domena szoku cieplnego zapewnia wiązanie z DNA, nowsze badania wykazały, że nie wszyscy członkowie rodziny białek Y-box wiążą tę konsensusową sekwencję Y-box. Białko wiążące Y-Box NF-GMb jest represorem promotora GM-CSF, który wiąże się z dwoma powtórzeniami 5. -CCTG-3. (21). Inne białko wiążące Y-box wiąże element odpowiedzi IFN (44). Białko Y-box RSV-EF-1 nie wiąże konsensusowej sekwencji wiążącej Y-box, ale raczej rozpoznaje kilka różnych sekwencji w promotorze RSV z najwyższym powinowactwem do sekwencji AAGGTGG (45). RSV-EF-1 jest zatem podobny do aktywowanej dbpB, która nie rozpoznaje konsensusowej sekwencji Y-ramki, ale wiąże się z ThRE w promotorze łańcucha B PDGF. Specyficzność DNA dbpB wiążąca DNA sugeruje, że ekspresja innych genów, które nie mają klasycznej sekwencji Y-box, może być również regulowana przez to białko Y-box. Cytpiozowa aktywowana trombiną dbpB wiąże jednoniciowy DNA, co jest zgodne z działaniem innych białek typu Y-box (21, 22, 38). Wiele promotorów ma jednołańcuchowe regiony DNA, które uważa się za ważne w regulacji ekspresji genów (przegląd, patrz odnośnik 46). Region jednoniciowy został dobrze scharakteryzowany w promotorze łańcucha A PDGF (47, 48). W naszej próbie znalezienia wewnątrzkomórkowych szlaków aktywowanych przez trombinę, które prowadzą do aktywacji dbpB, odkryliśmy, że aktywność PTP wydaje się być wymagana. Wiadomo, że trombina aktywuje fosfatazy w płytkach krwi, a ta aktywność ma udział w agregacji płytek (49. 51). Aktywacja PTP przez trombinę jest zaangażowana w powstawanie mikropęcherzyków przez płytki krwi (52) i w proliferację fibroblastów indukowaną przez trombinę. PTP SHP2 jest dodatnio połączony z jednym z receptorów aktywowanych proteazą, PAR-2 (53) i ma dodatnią rolę regulacyjną w kaskadzie sygnalizacyjnej IL-2 (54). Aktywność PTP ma wpływ na regulację transkrypcyjną, w tym udział w regulacji aktywacji NF-kB w EC (55). We wstępnych eksperymentach nie byliśmy w stanie wykryć fosforylacji tyrozyny DBPB o pełnej długości, co sugeruje, że mediatorem sygnalizacyjnym w szlaku aktywacji DBPB jest substrat PTP. Wykazaliśmy specyficzną wobec trombiny aktywację białka dbpB białka Y, które rozpoznaje sekwencję nukleotydową odpowiadającą ThRE w promotorze łańcucha B PDGF. Ta aktywacja wydaje się być pośredniczona przez szlak obejmujący PTP i wewnątrzkomórkową proteazę i nie wymaga syntezy białka de novo. Ta ścieżka umożliwi szybką odpowiedź komórkową na trombinę przez aktywację konstytutywnego białka dbpB obecnego w cytoplazmie EC, powodując jego wejście do jądra i modulację ekspresji genu docelowego. Podziękowania Podziękowania dla A. Buntinga i P. Hoanga za pomoc w hodowli komórkowej, L. Gudipathy za wykonanie testów RACE na komórkach bydlęcych, J. Drazba za pomoc przy mikroskopii fluorescencyjnej oraz A. Rabera za wykonanie analizy FACS. Praca ta została wsparta dotacją NIH HL-29582 na rzecz PE DiCorleto oraz nagrodą stypendialną dla OI Steniny z American Heart Association, Northeast Ohio Affiliate. Ludzkie żyły pępowinowe EC zebrano ze sznurków zebranych przez Departament Usług Porodu w Cleveland Clinic Foundation i Perinatal Clinical Research Centre (Nagroda Centralnego Ośrodka Badań Klinicznych NIH RR-00080) w Cleveland Metrohealth Hospital. Footnotes Olga I. Stenina i Earl J. Poptic przyczyniły się w równym stopniu do tej pracy.
[patrz też: łowisko u bogdana, łowisko u roberta, leclerc godziny otwarcia ]
[patrz też: leclerc godziny otwarcia, jak naturalnie rozjaśnić włosy, nefrolog dziecięcy wrocław ]