Skip to content

IFN- chroni krótkoterminowe linie komórek raka jajnika przed lizy CTL poprzez mechanizm zależny od CD94 / NKG2A ad 5

1 miesiąc ago

200 words

Barwniki kontrolne izotypu są przedstawione jako linia ciągła. Przedstawiono histogramy od jednego przedstawiciela, który wybarwia trzy z tego konkretnego guza. Zablokowanie receptorów hamujących CD94 / NKG2A przywróciło zabijanie komórek nowotworowych traktowanych IFN-y. Stało się jasne, że receptory komórek NK są eksprymowane na komórkach T, w szczególności na tych z fenotypem aktywowanym / pamięcią (18). Dlatego też badaliśmy rolę receptorów hamujących w pośredniczonej przez IFN ochronie OVAC. Po zaobserwowaniu tego zjawiska w dużej liczbie różnych kombinacji efektor-cel (Tabela 1) uważaliśmy za mało prawdopodobne, że ochrona była spowodowana rozpoznaniem konkretnego allelu HLA przez odpowiadający mu receptor hamujący. Zamiast tego skupiliśmy się na receptorze CD94 / NKG2A, ponieważ receptor ten może badać szerszy panel alleli HLA klasy I ze względu na rozpoznawanie HLA-E (7). Wszystkie nasze testowane klony i linie komórkowe T wyrażały hamujący heterodimer CD94 / NKG2A, określony przez mAb Z199, który specyficznie rozpoznaje CD94 / NKG2A (30) (dane nie przedstawione). Gdy preinkubuje się różne populacje komórek efektorowych, w tym specyficzny dla HLA-A11 . klon komórek T CD8 + (Figura 3a) i specyficzny dla peptydu BK289 (Figura 3b), z mAb anty-CD94 (HP3D9), efekt ochronny IFN-a został zniesiony (P <0,01 i P <0,05). Rozpoznanie traktowanego IFN - a OVAC 19 przez reaktywną wobec nowotworu linię komórek T RF1 również częściowo przywrócono (50%) w obecności HP3D9 (P <0,05, Figura 3c). Jako kontrolę limfocyty T wstępnie inkubowano z dopasowanym pod względem izotypów Ab wobec CD56, bez znaczącego wpływu na rozpoznawanie docelowych nowotworów. Wczesne doniesienia opisywały, że zabijanie komórek LAK nowotworów, podobnie jak zabijane przez TAL OVAC przedstawione w tym badaniu, może być hamowane przez IFN-y. (31), ale rola CD94 / NKG2A w tym zjawisku nigdy nie była badana. Figura 3d przedstawia całkowite przywrócenie lizy traktowanych IFN-a, autologicznych krótkoterminowych komórek nowotworowych w obecności mAb anty-CD94. Doniesiono, że limfocyty T CD8 + hodowane w IL-2 mogą wykazywać aktywność podobną do NK, omijając potrzebę stymulacji za pośrednictwem TCR, i że ta niespecyficzna liza jest tłumiona przez hamujące receptory wyrażane na komórkach T (32). Jednakże nie było tak w przypadku specyficznego dla peptydu klonu komórek BK289 (Figura 3b), ponieważ cele nie będące peptydem pulsacyjnym nie były zabijane nawet w obecności przeciwciała anty-CD94 (dane nie przedstawione). W związku z tym doszliśmy do wniosku, że IFN-y chronione OVAC poprzez wzmocnienie negatywnej sygnalizacji poprzez receptor CD94 / NKG2A. Figura 3 Blokada receptorów hamujących CD94 / NKG2A przywraca zabicie traktowanych IFN - a OVAC. Wpływ mAb anty-CD56 (MOC-1) lub anty-CD94 (HP3D9) na ochronę OVAC za pośrednictwem IFN-a oceniano w następujących sytuacjach: HLA-A11 + OVAC 16 zastosowano jako cel dla Specyficzny dla HLA-A11 . klon komórek T KV109 (a) i dla specyficznego dla IVT klonu komórek T BK289 (b). Stężenie peptydu w b wynosiło .g / ml. Rozpoznanie nie spulowanych celów przez BK289 było poniżej 5% i nie zostało pokazane. (c) Linię CTL RF1 ograniczoną przez HLA klasy I, reaktywną wobec nowotworu, zastosowano jako efektor przeciw nietraktowanym i traktowanemu IFN-a OVAC 19. (d) Reaktywność TAL 31 względem autologicznego OVAC 31. Pręty błędu przedstawiają SD potrójnie kultury. * P <0,05, ** P <0,01 wyznaczone za pomocą dwustronnego testu t Studenta. Ekspresja nieklasycznych cząsteczek klasy I. Ekspresję mRNA HLA-E przez OVAC oceniano za pomocą ilościowej PCR w czasie rzeczywistym. Pokazujemy, że OVAC traktowane IFN - a regulowały w górę ekspresję mRNA HLA-E (Figura 4a). Jednakże nie było różnicy w regulacji HLA-E między OVAC a długotrwałą linią komórkową Caov-4 propagowaną in vitro (fig. 4a). Nie było również żadnej korelacji między stopniem zwiększania ekspresji HLA-E w konkretnej linii komórkowej a ochroną tego guza za pośrednictwem IFN-a (dane nie pokazane). Wyniki te wykazały, że stopień ekspresji mRNA HLA-E nie może być jedynym czynnikiem określającym, czy nowotwory były chronione przez IFN-y. Jako ekspresję HLA-G, poprzez wiązanie peptydu sygnałowego HLA-G (Gsp) z cząsteczką HLA-E, można chronić komórki docelowe przed lizą komórkami efektorowymi wyrażającymi CD94 / NKG2A (33), zbadaliśmy wzór ekspresji tego nieklasyczna cząsteczka HLA na komórkach guza jajnika. Ekspresję HLA-G oceniano za pomocą analizy FACS 17 świeżo wyizolowanych próbek guza od pacjentów z rakiem jajnika. Dziewięć z 17 próbek (53%) było dodatnich pod względem HLA-G, jak określono za pomocą mAb 87G, który jest swoisty dla HLA-G1 (34). Na Figurze 4b pokazano trzy przykłady próbek nowotworu z dodatnim HLA-G1 ., wraz z barwieniem negatywnych (721,211) i pozytywnych (721,211 / G1) kontroli. [więcej w: nefrolog dziecięcy wrocław, łowisko mąkolno, łowisko u roberta ] [hasła pokrewne: sprzęt rehabilitacyjny dla dzieci, sezam właściwości lecznicze, biustonosze na duzy biust ]