Skip to content

IFN- chroni krótkoterminowe linie komórek raka jajnika przed lizy CTL poprzez mechanizm zależny od CD94 / NKG2A ad 6

1 miesiąc ago

773 words

Podwójne barwienie dla Ber-EP4 i HLA-G potwierdzało ekspresję HLA-G przez komórki nowotworowe (dane nie pokazane). Ekspresja powierzchni HLA-G była stopniowo tracona podczas hodowli in vitro krótkookresowych linii komórek nowotworowych. Jednakże ekspresję HLA-G można nadal wykrywać w całkowitych lizatach komórkowych wszystkich OVAC, jak określono w analizach Western blot (Figura 4c). Ponadto ekspresja HLA-G została zwiększona przez IFN-y. W przeciwieństwie do tego, nie znaleziono ekspresji HLA-G w długotrwałej linii komórkowej raka jajnika Caov-4 (Figura 4c). Wyniki te wykazały korelację między podwyższoną aktywnością HLA-G a ochronnym działaniem IFN-y. Figura 4 Ekspresja nieklasycznych cząsteczek HLA. (a) Ekspresję mRNA HLA-E oceniano we wskazanych OVAC za pomocą ilościowego testu PCR w czasie rzeczywistym. Wyniki przedstawiono jako zwiększenie krotności komórek traktowanych IFN-y (IFN) w porównaniu z komórkami nietraktowanymi (NT). Przedstawiono wyniki jednego z dwóch eksperymentów. (b) Ekspresję HLA-G przez świeżo wyizolowane komórki nowotworu jajnika monitorowano za pomocą analizy cytometrii przepływowej. Wskazane komórki barwiono kontrolą izotypową (mysie IgG2a) (linia ciągła) lub anty-HLA-G1 (87G) (linia kropkowana). Przedstawiono wyniki jednego reprezentatywnego zabarwienia co najmniej dziesięciu. (c) Analizę ekspresji HLA-G metodą Western blot w wskazanych OVAC i Caov-4 przeprowadzono przy użyciu swoistego dla HLA-Gp mAb MEM-G / w stężeniu .g / ml. LCL 721 211 i 721,221 transfekowane HLA-G1 (721,211 / G1) zastosowano jako kontrole pozytywne i negatywne. Rozcieńczono je 1:10 z powodu nadmiernej ilości HLA-G wyrażonej przez transfektant 721,221 / G1. Ekstrakty komórkowe z nietraktowanych i potraktowanych IFN-ą próbek naniesiono w równych ilościach, jak określono metodą Western blot dla P-aktyny (dane nie przedstawione). Rola peptydu pochodzącego od sekwencji liderowej HLA-G. Aby dokładniej zbadać rolę HLA-G, preinkubowaliśmy OVAC 19 z peptydem pochodzącym od sekwencji liderowej HLA-G w różnych stężeniach. Gsp, ale nie wiążący HLA, wiążący się z peptydem HIV, pośredniczona ochrona przed zabijaniem za pomocą linii CT1 RF1 wyrażającej reaktywność nowotworu CT94 / NKG2A (Figura 5). Zatem, ochrona OVAC z lizy CTL może być indukowana przez dodanie peptydu sekwencji liderowej HLA-G do komórek nowotworowych. Figura 5 Rola peptydu sekwencji liderowej HLA-G. OVAC 19 inkubowano z różnymi stężeniami Gsp, jak wskazano na figurze. HLA-A2 wiążący peptyd HIV (HIV-RT 476-484) zastosowano jako kontrolę ujemną przy 100 .g / ml. Pulsoksymetr OVAC 19 z HIV i Gsp był następnie stosowany jako cel w 4-godzinnym oznaczeniu uwalniania 51Cr. Jako efektor zastosowano ograniczoną HLA klasę I (3, specyficzną dla nowotworu linię CTL RF1. Przedstawiono wyniki jednego z dwóch eksperymentów. Dyskusja Dane przedstawione w tym badaniu wskazują na potencjalny niekorzystny wpływ IFN-y. może mieć pośredniczone przez komórki T rozpoznawanie komórek nowotworowych. Wykazujemy, że OVAC traktowane IFN – a są chronione przed specyficzną dla HLA-A11 (1a) i swoistą wobec peptydu (fig. 1b) lizą komórek T CD8 +. Ochrona ta była spowodowana zwiększoną sygnalizacją hamowania przez receptory CD94 / NKG2A wyrażane w populacjach komórek efektorowych, ponieważ została zniesiona przez blokadę CD94 (Figura 3). Te wyniki pokazują, że IFN-y może przesunąć równowagę sygnałów wyzwalających i hamujących, prowadząc do sytuacji, w której komórki T nie są w stanie zabić w inny sposób wrażliwych celów wyrażających HLA klasy I. Zatem zwiększona sygnalizacja hamowania przez CD94 / NKG2A wydaje się być ważniejsza dla CTL niż regulacja w kierunku dodatnim liganda sygnalizującego pozytywnie do TCR. Staje się oczywiste, że NKR, chociaż pierwotnie opisane na komórkach NK, są również ekspresjonowane i mają ważne funkcje na komórkach T (18). U zdrowych ludzi i myszy receptory CD94 / NKG2 są wyrażane przez mniej niż 5% komórek T CD8 + (35). Jednakże wykazano, że receptor CD94 / NKG2A jest regulowany w górę w aktywowanych komórkach T CD8 +, w wyniku stymulacji za pośrednictwem TCR lub stymulacji cytokiną przez TGF-a. lub IL-15 (36, 37). Wszystkie klony CTL, które zastosowano w tym badaniu, eksprymowały CD94 / NKG2A, a niektóre także koeksprymowały inne NKR, w tym LIR-1 i cząsteczki KIR KIR2DL2 i KIR3DL2 (dane nie przedstawione). Dodatkowo, w hodowlach TAL często eksprymowano zarówno CD94 / NKG2A, jak i LIR-1, głównie na limfocytach T CD56 +, CCR7a, CD45RA + i CD8 + (niepublikowane obserwacje) odpowiadających ostatecznie zróżnicowanym komórkom efektorowym (38). Dlatego nie można wykluczyć, że NKR inne niż CD94 / NKG2A przyczyniły się do pośredniczonej przez IFN – ochrony OVAC. Jednak udział ten prawdopodobnie nie będzie odgrywał istotnej roli, ponieważ nie wpłynie na niego blokowanie receptorów CD94 / NKG2A. Istnieje kilka teorii wyjaśniających, dlaczego komórki T wyrażają receptory hamujące (18)
[więcej w: błonnik witalny gdzie kupić, sanatoria nad morzem nfz, na czym polega rezonans magnetyczny ]
[więcej w: polipy woreczka żółciowego, na czym polega rezonans magnetyczny, błonnik witalny gdzie kupić ]