Skip to content

Odpowiedzi limfocytów T CD8 + Multichpitope na szczepionkę peptydową NY-ESO-1 powodują nieprecyzyjne ukierunkowanie guza ad 6

1 miesiąc ago

756 words

(b) PBMC od pacjenta LUD 24/1 zabarwiono jak w. Komórki dodatnie pod względem M + CD8 + bezpośrednio izolowano przez sortowanie komórek i klonowano w warunkach ograniczonego rozcieńczenia. Rozpoznanie guza przez klony komórek T otrzymane po tej procedurze oceniano na komórkach docelowych guza Me275 (A2 + NY-ESO-1 +) lub NA8 (A2 + NY-ESO-1 (3) we wskazanym stosunku E / T w nieobecności lub w teście obecność odpowiedniego peptydu. Peptydy NY-ESO-1 w regionie 157-167 wykazują znaczną oporność na degradację przez proteazy surowicy. Z obydwu wcześniejszych danych (12) i danych opisanych powyżej wynika, że w porównaniu z większością innych peptydów pochodzących od antygenu nowotworowego (22) zastosowano peptydy NY-ESO-1 stosowane w tym badaniu, a zwłaszcza peptyd 157-167, wykazywały rzadką immunogenność. Chociaż można to częściowo przypisać obecności w tym regionie wielu zachodzących na siebie epitopów komórek T CD8 + z ograniczeniem A2, jak opisano powyżej, okazało się, że inne czynniki, takie jak podatność na degradację przez proteazy w surowicy, mają znaczny wpływ na immunogenność peptydu (23). Dlatego interesujące było przeanalizowanie kinetyki degradacji peptydów NY-ESO-1 w regionie 157-167 w ludzkiej surowicy. Jak zilustrowano na Figurze 6, ta analiza ujawniła niezwykłą oporność na proteazy w surowicy peptydów 9-157 i 9-159, ponieważ nie wykryto żadnego znaczącego zmniejszenia rozpoznawania antygenu przez odpowiednią specyficzną populację komórek T po 24-godzinnej inkubacji w ludzkiej surowicy (fig. 6a). Co godne uwagi, podobne wyniki otrzymano dla peptydu 11-157, stosując zarówno populacje M9-157 +, jak i M9-159 + (Figura 6b). Oporność na proteazy surowicy była najprawdopodobniej związana z obecnością C w pozycji 165, ponieważ 9-157 analog peptydu niosący pojedyncze substytucje A w tej pozycji było podatne na degradację przez proteazy w surowicy, podobne do tego, co poprzednio zgłaszaliśmy dla Melan. Peptyd pochodzący od A (Melan-A 27-35) (23) stosowany tutaj jako kontrola wewnętrzna (Figura 6c). Ze względu na jego oporność na proteazy surowicy, postawiliśmy hipotezę, że peptyd 11-157 może wiązać się z cząsteczką A2 i być prezentowany komórkom T CD8 + jako takim. Zgodnie z tą hipotezą uzyskano skuteczne ponowne fałdowanie multimerów A2 / 11-157. Barwienie za pomocą M 11-157 próbek poszczepiennych stymulowanych 11-157 wykazało odrębne populacje komórek M11-157 +, które stanowiły 3,5, 3,4 i 0,47% wszystkich komórek T CD8 + w hodowlach dla pacjentów LUD 24/1, LUD 24/2 i LUD 24/3, odpowiednio. Natomiast w kulturach stymulowanych 9-157 nie wykryto znaczących poziomów komórek T M15-157 + CD8 +. Populacje komórek T 11-157 + CD8 + różniły się od populacji wykrywanych za pomocą multimerów zawierających krótsze peptydy NY-ESO-1 (Figura 2), ponieważ te ostatnie nie były barwione krzyżowo przez M11-157 (nie pokazano). Figura 6 Odporność peptydów NY-ESO-1 w regionie 157-167 na degradację w ludzkiej surowicy. Peptydy NY-ESO-1 9-157, 9-157 podstawionych analogów C165A, 9-159, 11-157 lub Melan-A 27-35 (AAGIGILTV) inkubowano w ludzkiej surowicy we wskazanych okresach czasu i aktywność antygenowa była następnie oceniano w teście CTL stosując jako komórki efektorowe wskazane poliklonalne linie monospecyficzne NY-ESO-1 lub, w przypadku peptydu Melan-A, specyficzny dla Melan-Ap klon LAU 203/17. Lizę swoistą dla antygenu oceniano na komórkach T2 znakowanych 51Cr w obecności seryjnych rozcieńczeń każdej próbki degradacji. (a) Peptyd 9-157 testowany z linią M 9-157 (górny panel) i peptydem 9-159 testowany z linią M 9-159 (dolny panel). (b) Peptyd 11-157 testowany z linią M 9-157 (górny panel) lub z linią M 9-159 (dolny panel). (c) Peptyd 9-157 C165A testowany z linią M 9-157 (górny panel) i peptyd Melan-A27 . 35 testowany za pomocą klonu LAU 203/17 (dolny panel). Surowica ludzka użyta w tym doświadczeniu była dezaktywowana termicznie, ale podobne wyniki uzyskano przy użyciu świeżej surowicy. Dyskusja Dużą uwagę obecnie skupia się na opracowaniu szczepionek przeciwnowotworowych, które zawierają zdefiniowane peptydy pochodzące z antygenu nowotworowego. W związku z tym pojawiły się krytyczne pytania dotyczące optymalnego składu takich szczepionek pod względem wyboru odpowiednich peptydów, formulacji (adjuwanta i sposobu dostarczania) i molekularnego monitorowania indukowanych odpowiedzi immunologicznych. W tym badaniu przeprowadziliśmy dokładną analizę odpowiedzi limfocytów T CD8 + na szczepionkę peptydową złożoną z 9-meru NY-ESO-1 157-165 i 11-meru 157-167 przy użyciu multimerów peptydów A2 / peptydów zawierających wszystkie potencjalne 9-merów i 10-merów zawartych w 11-mer. Istotnym odkryciem była duża niejednorodność odpowiedzi wywołanej przez szczepionkę, która obejmowała komórki T rozpoznające kilka zachodzących na siebie epitopów w regionie 157-167
[przypisy: dieta montignaca przepisy, jak naturalnie rozjaśnić włosy, leclerc godziny otwarcia ]
[hasła pokrewne: błonnik witalny gdzie kupić, zatańcz ze mną cda, leclerc godziny otwarcia ]